原代细胞培养

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原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和qi官后立即进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把di一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。***的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。

(一)胰酶消化法
1.器材:将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2-3秒钟(时间不能过长、以免酒精从口和***浸入体内)再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内(或将新生小鼠在超净台内)解剖取组织，置平皿中。
2.用Hank's液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
3.用手术剪将组织剪成小块(1mm)，再用Hank's液洗三次，转移至小青***瓶中。
4.视组织块量加入5-6倍体积的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
5.加入3-5ml培养液以终止胰酶消化作用(或加入胰酶***)。
6.静置5-10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。
7.1000rpm，离心10分钟，弃上清液。
8.加入Hank's液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
9.加入培养液1-2ml(视细胞量)，血球计数板计数。
10.将细胞调整到5?10/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。
细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同(如胶原酶，透明质酶等)。
(二)组织块直接培养法
自上方法第3步后，将组织块转移到培养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。于37℃静置3-5小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中(勿使组织漂起)，37℃继续培养。