内皮细胞成管实验外包

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实验步骤

1。试验前一天，96孔板、基质胶、需用到的枪头（一般200ul的吧）4度进行预冷或溶解。一般基质胶如果分装的小量的话可以试验前2个小时左右开始4度溶解，可以放在冰袋上进行溶解。
2.预冷的枪头吸取50ul左右的基质胶到96孔板中，可以在冰上进行，别让基质胶受热。别有气泡。
3.96孔板放入培养箱中凝胶30min、
4.在凝胶的等待中，消化细胞制备细胞悬液，时间刚刚好，加药组可以此时与细胞共混进行处理。
5.96孔板开始添加细胞悬液，一个孔50ul的细胞悬液，同样注意别有气泡进去了。枪头别触碰到胶。
6.培养一段时间后拍照，同样可以根据需要进行calcein荧光染色。
7.拍照，图像分析。
注意事项

1.一般做的多的是研究内皮细胞的小管形成。一般内皮细胞的代数不能太多，对于HUVEC的细胞系一般多采用7代以内细胞活力好的时候用于成管试验。我们养的大鼠原代内皮细胞采用的是3代内皮细胞用于管形成的试验。如果细胞状态不佳成管肯定也形成不好。
2.基质胶。目前基质胶都采用的是BD公司的Matrigel，。目前市场上基质胶也有好几种货号356234、356235 
等几种。主要在于生长因子溶度上的区别。在做小管形成试验时注意选择吧。
3.关于铺胶，基质胶比较贵，一般拿96孔板铺的胶一个孔50ul左右，铺胶前可以用无血qing的基础培养基对基质胶进行稀释的，我试过的比例为2倍吧。稀释太多了估计内皮细胞反而不会成管。需要注意的是96孔板底面凹凸不平本身拍照比价难聚焦，如果胶里在混入气泡图片会很难看，所以在铺胶前注意下手法别留下气泡