MKN-1人胃癌细胞

详情描述：

　　细胞介绍

　　该细胞系由SAkiyama建立，源于一位35岁患有印戒细胞癌的女性的胃淋巴结。

　　细胞特性

　　1）来源：胃癌

　　2）形态：上皮细胞样，贴壁生长

　　3）含量：>1x10^6

　　4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

　　5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

　　运输和保存

　　可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：

　　（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；

　　（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

　　（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

　　细胞接受后的处理：

　　1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

　　2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

　　3）弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。

　　4）如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

　　5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

　　细胞用途：仅供科研使用。

　　细胞培养操作规程，供参考

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

　　2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

　　3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　二．细胞处理：

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。

　　3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。

　　4.移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

　　注：第1次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

　　3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

　　下面T25瓶为例：

　　1，细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

　　2，4min1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10E6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

　　3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。