IBRS-2猪肾细胞智立中特生物

详情描述：

　　细胞名称IBRS-2（猪肾细胞）

　　种属猪

　　年龄（性别）

　　组织来源肾

　　生长特性贴壁

　　细胞形态上皮细胞样

　　背景描述IBRS-2细胞建系于1964年；IBRS-2细胞可用于很多猪病毒增殖，包括猪的嵌杯状病毒、猪细小病毒、水泡性口炎病毒、非洲猪瘟病毒、口蹄疫病毒等。

　　生长培养基DMEM高糖＋10%FBS＋1%P/S

　　培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

　　细胞接收后的处理

　　1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

　　2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10?，20?）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

　　3）半贴细胞或贴壁不牢（悬浮）细胞：T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。

　　4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第1次传代建议T25培养瓶1：2传代。

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备DMEM(包含2mML-谷氨酰胺，0.11g/L丙酮酸钠)培养基；优质胎牛血清10%；P/S青霉素-链霉素1%。

　　2）注意事项：

　　（a）在细胞生长的初始阶段，细胞以贴壁的形式生长并呈现出长方体的形态和有“伪足”延伸。随着培养时间的增加，细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。细胞密度达到一定的程度，会有细胞以悬浮的方式散落到到培养基中，镜下观察会发现悬浮和贴壁的细胞会同时出现。

　　（b）该细胞传代时不需要用胰酶消化。传代时，用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落，收集离心后重悬接种到新的培养瓶中。

　　（c）该细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形。当细胞密度较大时，细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起，有些细胞甚至脱落漂浮。这些漂浮的细胞是存活的，在传代时应收集起来，离心后细胞沉淀可以继续培养。（d）血清质量差异可能引起细胞贴壁能力变化，应选用高质量的胎牛血清。

　　3）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　4）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　二．细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。

　　该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：

　　该细胞用细胞刮铲替代胰酶来对细胞进行处理。用无菌细胞刮铲刮拭细胞附着培养表面将细胞刮落，收集细胞后离心去上清，重悬后接种到新的装有新鲜培养液的培养瓶内。收货后第1次传代1:2进行，后续可以根据实际的情况以1:2~1:4的比例进行传代。

　　3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。